В.А. Кошечкин, З.А. Иванова
Лабораторная диагностика обеспечивает выполнение главной задачи диагностики и лечения туберкулеза - выявление у больного МБТ.
В лабораторную диагностику на современном этапе входят следующие методики:
Сбор мокроты, содержащей МБТ, проводится в специально подготовленном помещении больницы или в амбулаторных условиях. Собранные образцы должны быть немедленно отосланы для микробиологического исследования.
Для этого необходимо использовать специальные контейнеры. Они должны быть прочными, устойчивыми к разрушению, иметь широкую горловину с герметически завинчивающейся пробкой, чтобы предотвратить случайное вытекание из нее содержимого.
Существует два типа контейнеров. Один - распространяемый международной организацией UNICEF (Детский фонд ООН) - является пластмассовой пробиркой с черным основанием, прозрачной крышкой, утилизация которого может быть обеспечена сжиганием. На контейнере (не на крышке) отмечаются данные обследуемого.
Другой тип контейнера сделан из прочного стекла с завинчивающейся крышкой. Такой контейнер может многократно использоваться после дезинфекции, кипячения (10 мин) и полной очистки.
При сборе образцов риск инфицирования очень большой, особенно когда больной выкашливает мокроту. В связи с этим процедуру необходимо проводить как можно дальше от посторонних лиц и в специальном помещении.
Дополнительные процедуры для сбора МБТ
Забор образцов из гортани тампоном.
Оператор должен носить маску и закрытый халат. Язык пациента вытягивается изо рта, одновременно вводится тампон за языковое пространство ближе к гортани. Во время кашля пациента можно собрать часть слизи. Тампон помещается в закрытый сосуд и направляется в бактериологическую лабораторию.
Промывные воды бронхов . Для своевременной диагностики туберкулеза легких и других органов большое значение имеет раннее распознавание поражения бронхов. Для этой цели в практике применяется исследование промывных вод бронхов. Методика получения промывных вод не сложна, но надо помнить о противопоказаниях к ее использованию. Людям старческого возраста промывание бронхов следует делать с большой осторожностью. Процедура противопоказана при бронхиальной астме и явлениях сердечно-легочной недостаточности.
Для получения промывных вод бронхов больному анестезируют дыхательные пути. Гортанным шприцем вводят 15-20 мл физиологического раствора, подогретого до 37 °С. Это усиливает секрецию слизистой бронхов. Откашливая, больной выделяет промывные воды. Их собирают в стерильную посуду и обрабатывают обычным способом для бактериоскопии и посева на средах для выращивания МБТ. Производится исследование отдельного бронха или целого ветвления. Метод бактериоскопии промывных вод и особенно их посев способствует увеличению числа находок МБТ на 11-20%.
Промывные воды желудка . Промывные воды желудка нередко исследуются у детей, которые не умеют откашливать мокроту, а также у взрослых при скудном количестве мокроты. Метод не труден и дает довольно большой процент обнаружения МБТ в промывных водах желудка у больных не только легочным туберкулезом, но и туберкулезом других органов (кожи, костей, суставов и др.).
Для получения промывных вод больной утром натощак должен выпить стакан кипяченой воды. Затем желудочным зондом собирают воды желудка в стерильную посуду. После этого воды центрифугируют, мазок делают из гнойных элементов полученного осадка, обрабатывают и красят обычным способом, как мокроту.
Исследование спинно-мозговой жидкости . При подозрении на туберкулезный менингит необходимо в первые дни сделать анализ спинно-мозговой жидкости. При взятии спинно-мозговой жидкости обращается внимание на степень давления, под которым она вытекает из спинно-мозгового канала. Жидкость, вытекающая непрерывной струей и под большим давлением, свидетельствует о повышенном внутричерепном давлении. Жидкость, выделяющаяся крупными частыми каплями, говорит о нормальном давлении, а редкими малыми каплями - о пониженном давлении или о препятствии для ее истечения.
Материал для исследования берут в две стерильные пробирки. Одну оставляют на холоде, и через 12-24 ч в ней образуется нежная паутинообразная пленка. Из другой пробирки берут ликвор для биохимических исследований и изучения цитограммы.
Бронхоскопия . В том случае, если другие методы не сумели обеспечить постановку диагноза, применяется сбор материала непосредственно из бронхов, через бронхоскоп. Биопсия выстилающих бронхи тканей может иногда содержать типичные для туберкулеза изменения, выявляемые при гистологическом исследовании.
Плевральная жидкость . В плевральной жидкости МБТ могут быть выявлены с помощью флотации, но обычно обнаруживаются только в культуре. Чем большее количество жидкости используется для культурального исследования, тем вероятней положительный результат.
Биопсия плевры . Биопсия плевры может быть полезна в тех случаях, когда имеется плевральный выпот. Для ее проведения необходимы обученный персонал, средства для проведения гистологического исследования, специальная биопсийная игла.
Биопсия легкого . Биопсия легкого должна выполняться хирургом в стационарных условиях. Диагноз может быть сделан на основе гистологического исследования или обнаружения МБТ в секционном материале.
Микроскопия мокроты
Уже более 100 лет существует самый простой и быстрый метод выявления кислотоустойчивых микобактерий (КУМ) - микроскопия мазка. КУМ - это микобактерии, способные оставаться окрашенными даже после обработки кислотными растворами. Они могут быть выявлены с помощью микроскопа в окрашенных образцах мокроты.
Микобактерии отличаются от других микроорганизмов характерным составом своей клеточной стенки, состоящей из миколовых кислот. Кислоты благодаря своим сорбционным свойствам обеспечивают способность окрашиваться по методикам, выявляющим КУМ.
Резистентность к стандартным методам окрашивания и способность МБТ сохранять раннее окрашивание является следствием высокого содержания липидов во внешней оболочке клетки. Вообще грамположительные бактерии в своем составе имеют приблизительно 5% липидов или воска, грамотрицательные организмы - около 20% и МБТ – примерно 60%.
Бактериоскопия мокроты или другого отделяемого проводится «простым» методом и методом флотации.
При простом методе мазки приготавливают из комочков мокроты или капель жидкого вещества (экссудата, промывных вод и др.). Материал помещают между двумя предметными стеклами. Один из мазков окрашивают по Граму на общую флору, другой - на туберкулезные микобактерии.
Основным методом окрашивания является карбол-фуксиновый (метод Циля-Нильсена). Главный принцип этого метода - в способности наружной оболочки МБТ адсорбировать карбол-фуксин. Поглощая красный карбол-фуксин, наружная мембрана МБТ настолько прочно связывает краску, что ее нельзя удалить обработкой серной кислотой или солянокислым спиртом. Затем образец обрабатывается метиленовым синим. При эмерсионной микроскопии МБТ появляются в виде красных палочек на синем фоне.
Начиная с 1989 г., в современных лабораториях флюоресцентная микроскопия в значительной степени вытеснила старые методы, основанные на кислотоустойчивости микобактерий. Этот метод базируется на тех же свойствах МБТ, связанных со способностью наружной мембраны МБТ, богатой липидами, удерживать соответствующий краситель, в данном случае - аурамин-родамин. МБТ, поглощая это вещество, одновременно устойчивы к обесцвечиванию солянокислым спиртом. При этом МБТ, окрашенные аурамин-родамином, флюоресцируют под воздействием ультрафиолета или других световых спектров, выделенных соответствующими фильтрами. Под воздействием ультрафиолета МБТ проявляются как ярко-желтые палочки на черном фоне.
Подготовка образца для культурального исследования
При поступлении в современную лабораторию диагностического материала с возможным содержанием МБТ проводятся следующие диагностические манипуляции:
Молекулярно-генетические методы диагностики МБТ
Расшифровка генома МБТ открыла неограниченные перспективы в разработке генетико-молекулярных тестов, в том числе в изучении и выявлении МБТ и диагностике в организме человека.
Классические методы, применяемые для обнаружения в организме микобактерий туберкулеза, такие, как бактериоскопия, культуральный, иммуноферментный, цитологический, весьма эффективны, но отличаются или недостаточной чувствительностью, или длительностью выявления МБТ. Развитие и совершенствование молекулярно-диагностических методов открыло новые перспективы для быстрого выявления микобактерий в клинических образцах.
Наибольшее распространение получил метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
.
Этот метод основан на амплификации особых фрагментов бациллярной ДНК, которая обнаруживается в диагностических образцах. Тест предназначен для выявления МБТ в мокроте или идентификации разновидности бактерий, которые произрастают в культуральной среде.
Реакция ПЦР позволяет проводить идентификацию МБТ в диагностическом материале за 5-6 ч (включая обработку материала) и обладает высокой специфичностью и чувствительностью (в диапазоне от 1-10 клеток в образце).
В разделе на вопрос Что такое "Инфицирован МБТ"? Растолкуйте понятие, пожалуйста. И что это вообще значит? что-то связанное с туберкулёзом.. заданный автором Јурочка Кузьмина
лучший ответ это мбт--микобактерии туберкулеза. возбудители этого заболевания
туб. инфицирование не означает, что человек болен. он может быть носителем
но зачастую такой диагноз ставится на основании пробы Манту--исследования крайне недостоверного и низкоинформативного.
Ответ от Ольга
[гуру]
Инфицирование МБТ означает, что человек встречается в своей жизни с возбудителями туберкулеза и имеет иммунитет к ним. Иммунитет к туберкулезу не стойкий и если прекращается попадание в организм микобактерий туберкулеза, исчезает и иммунитет. Проба Манту как раз и показывает есть иммунный ответ или нет. В советское время, когда туберкулеза было мало, эта проба почти у всех была отрицательной. Сейчас практически у всех положительная. Но инфицирование МБТ вовсе не означает болезнь.
Ответ от Ёергей Рыженин
[гуру]
Микобактерия туберкулеза (МБТ) является главной причиной заболевания туберкулезом человека. Переносчики – человек, домашние и дикие животные, птицы. Во внешней среде микобактерия туберкулеза достаточно устойчива. В воде она может сохраняться до 150 дней. Вне живого организма они остаются жизнеспособными в течение многих месяцев, в особенности в темных, сырых помещениях. МБТ по своей природе нечувствительны ко многим антибиотикам. Диагностика проводится посредством ПРЦ.
Вопрос врачу:
Здравствуйте! Моей дочери 5 лет, после очередной манту нас направили к фтизиатру. Он поставил диагноз инфицирован МБТ. Назначили рентген грудной клетки, анализы мочи, кровь, кал на я/г и зачем то пройти окулиста. БЦЖ-р.4 (12 месяцев) манту: 2005г. — 13, 2006г. — 15, 2007г. — 11, 2008г. — 13, 2009г. — 13. Рентген сделали. Результаты рентгена: В легких без очаговых и инфильтративных изменений. Корни структурны, не расширены. Диафрагмма не изменина. Нельзя исключить расширение паратрихильных, трахиобронхиальных л/у слева. 1)Как определить когда ребенок был инфицирован? 2) На сколько это серьезно и заразно (у меня еще грудной ребенок, надо ли его обследовать?) 3) если манту с первой была большая почему направляют только сейчас, раньше это был не показатель? 4) помогите расшифровать рентген. Что значит:»Нельзя исключить расширение паратрихильных, трахиобронхиальных л/у слева.» Заранее спасибо за ответ.
Здравствуйте
1. Точно определить момент заражения невозможно, однако судя по результатам пробы манту можно предположить, что заражение произошло в 2006 или ранее.
2. Инфицирование микобактериями туберкулеза (МБТ) может дать начало активной форме туберкулеза, однако в большинстве случаев туберкулез так и не возникает. Инфицированный человек не заразен, и потому в вашем случае нет оснований обследовать грудного ребенка (конечно, если источник инфекции от которого мог заразиться старший ребенок это не человек из вашего окружения).
3. Мы затрудняемся ответить на этот вопрос, так как он относится к компетенции ваших врачей.
4. Данную фразу можно истолковать следующим образом: вполне вероятно, что у ребенка расширены лимфатические узлы, располагающиеся слева от трахеи (по крайней мере нет основания сказать, что лимфатические узлы слева нормальных размеров). Увеличение лимфатических грудной клетки может быть одним из признаков заражения МБТ.
